钻研团队首先对MSC-EV进行了分离和多维度表征，以确认分离与酶切处置后的EV的生物特点是否变动。该钻研选取iWJ-MSC-EV（infrapatellar fat pad-derived Wharton's Jelly MSC, iWJ-MSC，髌下脂肪垫起源华通胶间充质干细胞), 发现PNGase-F 处置并未影响EV的分离回收率与最终产量。

通过对EV数量的表征（NTA、蛋白质、脂质定量以及流式细胞术），批注PNGase-F酶切没有影响MSC-EV的产量; 通过免疫印迹检测EV阳性标志蛋白，并以ER标志物排除细胞碎片传染；此表，使用冷冻电镜观察EV状态和膜齐全性，NTA测定粒径散布，图像显示出了齐全的、圆形的双层膜纳米囊泡，且粒径维持在50-250nm。这些了局提醒，PNGase-F酶切并未影响本钻研中MSC-EV的分离和特点，为后续职能与机造钻研提供了靠得住的样性质量保险。

那么MSC-EV表表的N-糖基化建饰是否影响内皮细胞的激活及对EV的摄？钻研团队使用了荧鲜明微镜，观察评估了TNF-α 激活刺激或未刺激前提下的HUVEC单层细胞对iWJ-MSC-EV的摄取情况。钻研人员发现，在无TNF-α 激活刺激前提下，HUVEC细胞可能有效摄取CFSE-labelled iWJ-MSC-EV ，显微镜下可见细胞内出现绿色荧光；然而，当EVs经PNGase-F酶切处置后，在无TNF-α激活刺激的静息内皮中，摄取险些齐全隐没。相反，钻研发现不论是否使用PNGase-F酶切除EV表表的N-糖基化建饰，被TNF-α激活激活后的HUVEC均能摄取EVs，并且显示出相当的细胞内绿色荧光强度，这批注炎症内皮（TNF-α激活) 通过N-糖基化非依赖蹊径摄取EV。

为了进一步评估在生理有关前提下的EV捕获，钻研人员选取了流动模型来模仿体内环境。了局显示，在模仿的流动模型下，每个细胞可检测到的绿色荧光区域显著比静态尝试前提下削减，反映了更严格的EV捕获环境。只管如此，不论是否使用PNGase-F处置EVs，在TNF-α 激活活化的HUVEC单层细胞中依然可检测到绿色荧光，批注在动态模仿环境下依然可能有效捕获EV。

这些了局批注，固然在流动前提下的EV信号绝对值较低，但在静态前提下观察到的相对生物学趋向依然维持，注明无论N-糖基化状态若何，TNF-α 激活活化的内皮细胞能有效摄取EV。进一步的机造钻研发现，PNGase-F处置后，只管炎症内皮仍可摄取EV，但这些EV失去了抑造CCR2介导的单核细胞黏附的能力，提醒N-糖基化不仅调控摄取，更可能通过摄取后的内皮沉编程或EV货物递送影响炎症反映。在模仿生理剪切流的前提下，去糖基化EV无法抑造单核细胞在炎症内皮上的滚动与黏附级联反映。

MSC-EVs是再生医学与免疫医治中极具潜力的“无细胞”战术，其安全性在早期钻研中总体优良。这项钻研不仅在多种体表模型中揭示了N-糖基化在MSC-EV免疫调节活性中的作用和分子机造，也为通过工程化刷新MSC-EV的N-糖基化提升EV对炎症内皮的靶向性提供了新的思路。

细胞表囊泡（Extracellular Vesicles, EVs）是一类险些所有活细胞城市开释的囊泡物质，内含多种生物活性分子，蕴含核酸、蛋白质、脂质和代谢物。表泌体（exosome）是细胞表囊泡（Extracellular Vesicles, EVs）中的一个亚类，直径约30–150 nm，经内体—多囊泡体(MVB)蹊径天生并排泄，表表常富集CD9、CD63、CD81等四跨膜蛋白，以及TSG101、Alix等内体标志物。

近年来，MSC起源细胞表囊泡（下称MSC-EVs或MSC-sEVs）逐步成为主流学术表述, 但尚存在二个概想混用的情况。因而在阅读文件或有关内容时，我们一方面必要把稳分辨作者使用的是exosome还是EVs，另一方面也必要并关注其囊泡粒径、生物标志物表征, 及分离步骤等。以下是细胞表囊泡的异质性图示2：

针对MSC细胞表囊泡/表泌体钻研领域，广东会官网生物提供OptiVitro MSC无血清造就基MH02，可通过增长血清代替物混合成齐全造就基后使用，合用于对起源于脐带、骨髓、脂肪等组织的植块法、消化法等的MSC原代分离、扩增、与MSC细胞表囊泡/表泌体出产。此表，我们为生物技术、造药、医院等机构提供MSC造就基定造代工服务。

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